Cómo extraer el ADN de las hojas de la planta

materia orgánica vegetal se compone de muchas células , cada una de las cuales contienen el ADN que contiene las instrucciones para el crecimiento y la función . Los científicos pueden desear estudiar parte o la totalidad del material genético presente en las células , y por lo tanto necesitan para extraer de forma segura el ADN a partir del material estructural y maquinaria de la célula que rodea it.Things que necesitará
2 gramos de hojas
maja y mortero
Centrífuga
Baño de agua
Equilibrio
Gasa
tubos centrífuga Seis 15ml
Un 1,5 ml Eppendorf tubo
100ml CTAB Extraction Buffer
2 ml Beta - mercaptoetanol
7ml 24 : 1 cloroformo : Alcohol isoamílico mezcla
50 microlitros de RNAsa A en una concentración de 10 mg /ml Pipetas

6 ml de isopropanol
2ml 70 % de etanol
1 ml de agua desionizada estéril

Mostrar Más instrucciones Matemáticas 1

Llene el tanque de agua hasta el nivel recomendado con agua , que varía con las especificaciones de cada fabricante , y la convierten en . Ajuste el baño de agua a 65 grados Celsius y dejar que se adapte a la temperatura . Coloque el recipiente de isopropanol en hielo . Ajuste el centrifugar a 3.000 revoluciones por minuto a una temperatura de 20 grados Celsius.
2

Pesar 2 g de hojas sobre un equilibrio y los situará en un mortero . Añadir suficiente beta- mercaptoetanol mediante una pipeta a un contenedor de tampón de extracción de modo que el producto final se compone de uno a dos por ciento de beta- mercaptoetanol. Por ejemplo , si tiene un volumen de tampón que mide aproximadamente 100 ml , a continuación, añadir 2 ml de beta - mercaptoetanol al recipiente y mezcle bien .
3

Pipeta tampón de extracción 7 ml en el mortero . Triturar la mezcla en un líquido homogéneo con la mano del mortero .
4

Doble un pedazo de gasa sobre para formar cuatro capas . Colar y exprimir el líquido a través de las capas en un tubo de centrífuga de 15 ml .
5

Coloque el tubo en el baño de agua durante 60 min 30to utes . Agitar el tubo para mezclar su contenido cada cuarto de hora . Deje que el tubo se enfríe a temperatura ambiente después del período de tiempo completo es de hasta .
6

Rellenar el tubo con la mezcla de cloroformo y alcohol isoamílico ( este contiene 24 partes de cloroformo a una parte isoamilalcohol ) , por lo que el tubo contiene aproximadamente la mitad de la muestra y la mitad de la nueva adición de líquidos . Tapar el tubo y le dé la vuelta un par de veces lentamente para las mezclas de fluidos.
7

Ponga el tubo en la centrífuga y se deja girar durante 10 minutos .
8

Colocar 50 ml de ARNasa a en un nuevo tubo de centrífuga. Pipetear el sobrenadante ( la capa transparente en la parte superior del tubo por encima de una capa blanca de los desechos ) en el primer tubo fuera y moverlo al segundo tubo . Tapar el tubo y se invierte unas cuantas veces para mezclar el contenido juntos. Mantenga el tubo a temperatura ambiente durante una hora .
9

Realice los pasos 6 y 7 otra vez dos veces por lo que tiene un tubo de muestra clara . Entonces pipetear hasta 9 ml del líquido claro desde el tubo final en un nuevo tubo . Añadir 6 ml de isopropanol y invertir los tubos de 10 veces de una manera suave por lo que el ADN se cae de la solución y en una forma sólida . Entonces se centrifuga el tubo durante 10 minutos , lo que debería crear un pellet de ADN en la parte inferior del tubo.
10

Verter el líquido en el tubo por lo que el pellet se mantiene. Pipetear 2 ml en etanol 70 % y el lugar de nuevo en la centrífuga durante cinco minutos. Se retira la porción líquida de nuevo. Utilice una punta de pipeta estéril para recoger el sedimento y moverlo a un tubo Eppendorf de 1,5 ml estéril. Pipetear en 200 microlitros de agua desionizada estéril y se dejó que el ADN se disuelve completamente en el líquido , que puede tomar durante la noche. La muestra está lista para el análisis .