GSH Ensayo Protocolos

glutatión o GSH es una proteína que se encuentra en las plantas y los animales . Se trabaja para ayudar a las reacciones enzimáticas en la desintoxicación de contaminantes ambientales . Además , facilita el transporte de aminoácidos dentro de las células y ayuda a mantener las reacciones de reducción sulfhidrilo de la proteína. Protocolos de ensayo GSH GSH utilizan tampones, normas, sustrato , las enzimas y reactivos . Siguiendo el procedimiento específico es pertinente para el resultado del ensayo. Enzimática Reciclaje Método

El método de reciclaje enzimática , para GSH , utiliza glutatión reductasa cuantificar GSH . Este protocolo es específicamente para el plasma , tejido o muestras de células cultivadas. Añadir el reactivo DTNB (ácido 5-5' - ditio -bis- 2 - nitrobenzoico) a GSH . El grupo sulfhidrilo en GSH reacciona con el reactivo y produce un ácido amarillo llamado 5 -tio- 2 - nitrobenzoico ( TNB ) . Añadir glutatión reductasa a la mezcla de ácido y GSH GSH para reciclar y producir más ácido. En este procedimiento, la tasa de producción de ácido es proporcional a la reacción de reciclaje de GSH ; por lo tanto, medir la absorbancia del ácido TNB usando un espectrofotómetro . La absorbancia proporciona una estimación de la cantidad real de GSH en la muestra .
Celular hepática glutatión Ensayo

Este protocolo se analiza la cantidad de GSH en hepatocarcinoma humano ( cáncer de hígado células ) . Para llevar a cabo este procedimiento , utilice el método colorimétrico para la determinación de GSH para reducir y oxidar GSH . Reducir GSH utilizando 5-5' - ditiobis (ácido 2 - nitrobenzoico o DTNB ) para formar el

producto de color ácido 2 - nitro - 5 - tiobenzoico y glutatión oxidado ( GSSG) . Utilice la glutatión reductasa para reducir GSSG GSH para formar de nuevo. Con el fin de medir la cantidad de GSH en las células del hígado , leer la muestra a 415 absorbancia cinéticamente en un lector de microplacas .
Celular Apoptosis

En este protocolo , GSH se utiliza para detectar la apoptosis celular (muerte ) a través de la medición de la disminución de GSH reducida . Una disminución en la concentración de GSH celular es un indicador de la muerte celular . Teñir las células de la muestra con verde thiolite no fluorescente . El verde thiolite se acumula en el citosol (plasma celular) y las mitocondrias ( central eléctrica ) de la célula . Utilice un citómetro de flujo a 490/520 nanómetros para visualizar la cantidad de GSH en las células .
Concentración total de GSH en animales y las plantas Muestras

Medir la concentración de GSH total en ambos la forma reducida y oxidada en diferentes muestras de animales y plantas . Añadir el reactivo de tiol en general , 5-5' - ditiobis [ ácido 2 - nitrobenzoico ] . El reactivo de tiol reacciona con GSH para formar cromóforo 412 nm , ácido 5 - tionitrobenzoico ( TNB ) y GS- TNB . Añadir glutatión reductasa y Beta nicotinamida adenina dinucleótido fosfato ( NADPH ) para reducir GS - TNB . El glutatión también lanzará una segunda molécula de TMB y reciclar el GSH . Además, cualquier GSH oxidado ( GSSG) presente en la mezcla de la reacción fromed disulfuro se reduce también a GSH . Utilice un lector de microplacas a 405 nanómetros para leer el nivel de absorbencia e indicar la concentración total de GSH .