Mecanismo de polimerización en SDS Gel

SDS-PAGE es un procedimiento científicos usan para separar proteínas en base a la forma en que migran a través de un gel . Los geles están hechas de un polímero llamado de poliacrilamida. Cuando usted hace un gel de poliacrilamida , se empieza con una mezcla de productos químicos : acrilamida , bisacrilamida , SDS y una sustancia química tampón para estabilizar el pH . Adición de un compuesto de persulfato y otra sustancia química llamada TEMED hará que la acrilamida para formar largas cadenas o polimeriza . Iniciación

El ion persulfato de persulfato de amonio es el equivalente a dos iones sulfato unidos por un enlace débil de oxígeno - oxígeno. Este vínculo puede escindir o romperse en dos , produciendo radicales sulfato --- moléculas altamente reactivas con un electrón no apareado . El radical puede reaccionar con sulfato de agua para generar un radical hidroxilo , o puede reaccionar con el monómero de acrilamida para iniciar la reacción de polimerización. TEMED actúa como un catalizador que acelera la velocidad a la que el persulfato de iones forman radicales .
Chain Reaction

Una vez que un radical hidroxilo o sulfato se ha formado , se ataca a un monómero de acrilamida , teniendo uno de los electrones en el doble enlace . El monómero de acrilamida es ahora un radical con un electrón no apareado , por lo que va a atacar a otro monómero de acrilamida en una manera similar . Esta serie de eventos crea una cadena de rápido crecimiento de monómeros de acrilamida unidos por enlaces simples . La reacción en cadena sólo termina cuando dos radicales reaccionan entre sí .
Cross - Linking

Si acrilamida estuvieron presentes por sí , sería no formar el gel espeso que necesita para el SDS - PAGE. Los polímeros tienen que ser reticulado para formar un gel con las propiedades adecuadas , y ahí es donde bisacrilamida entra. Los dobles enlaces en bisacrilamida también sirven como un objetivo para los radicales en la reacción , y porque tiene dos sitios donde pueden ser atacados por los radicales , se incorporó finalmente en dos de los polímeros en crecimiento. En consecuencia , los polímeros terminan con enlaces cruzados entre ellos a sitios al azar a lo largo de la longitud de cada cadena.
Consideraciones

La reacción de polimerización es muy rápido , así que una vez ' he añadido el TEMED y el persulfato, que se llevará a cabo muy rápidamente . La pureza de sus reactivos es importante ya que los contaminantes pueden afectar sus resultados . El ácido acrílico , por ejemplo, se puede añadir al polímero y crea sitios de intercambio iónico que podrían causar variaciones locales de pH en el gel. El gel resultante todavía puede contener algunos monómero de acrilamida y acrilamida es una neurotoxina , por lo que siempre tome las precauciones adecuadas cuando se trabaja con geles de SDS .