Los métodos para un sistema de levadura de tres híbrido

replicación de cromosomas , el procesamiento del ARN mensajero , la traducción de proteínas , y las decisiones críticas en las primeras etapas de desarrollo dependen de la interacción de ADN , ARN y proteínas . Estas interacciones son los procesos biológicos básicos de la expresión génica y la síntesis de proteínas . Los científicos a menudo utilizan Saccharomyces cerevisiae , la misma especie de levadura utilizadas en la cocción y elaboración de la cerveza , para estudiar los genes que codifican para proteínas específicas y analizar las interacciones entre proteínas y otras moléculas . El sistema de tres híbridos de levadura es una de las tres variantes del sistema de dos híbridos de levadura utilizado para estudiar estas interacciones . El

El método de dos híbridos sistema de dos híbridos se utiliza para detectar interacciones proteína-proteína mediante la búsqueda de la expresión de un gen reportero . Muchas proteínas tienen al menos dos dominios o unidades estructurales y funcionales discretos . GAL4, una proteína que se encuentra en Saccharomyces cerevisiae, tiene un dominio de unión a ADN ( DBD ) y un dominio de activación (AD ) . En este método , una proteína híbrida se fusiona con el DBD y una segunda a la AD . Sin gen indicador se expresa por la fusión de uno solo de los híbridos . Dado que el gen reportero GAL4 sólo se expresa cuando ambos híbridos están presentes , la interacción proteína-proteína se indica .
El Sistema Híbrido de tres

El método identifica tres híbridos un gen reportero para detectar la interacción de la proteína con el ARN . La primera proteína híbrida consta de un DBD fusionado directamente a un dominio de unión a ARN . El segundo consiste en la AD del factor de transcripción GAL4 ligado a una proteína de unión de ARN . Los dominios de unión a ARN interactúan con una molécula híbrida de ARN que se une a las dos proteínas híbridas para formar un complejo . La formación del complejo provoca la expresión del gen indicador de GAL4 . Dado que el gen reportero de sólo está activada por la formación del complejo de tres híbridos , su presencia indica la interacción de ARN y proteína .
El sistema de un solo híbrido

el método de un solo híbrido se utiliza para detectar la interacción de la proteína con el ADN . Un sistema de un solo híbrido fusiona una sola proteína , que une el AD directamente a la DBD . En lugar de la identificación de un gen reportero , este método busca una proteína específica que debe reconocer una secuencia diana de ADN . La presencia de la proteína específica indica la interacción de la proteína con el ADN .
El sistema de una de dos híbridos

El uno-dos método híbrido se utiliza para estudiar la proteína - proteína y proteína-DNA simultáneamente. El uso de cepas de levadura de nuevo desarrollo , este método emplea el gen indicador de GAL4 para identificar las interacciones proteína-proteína y un consenso de p53 para identificar la interacción proteína-DNA . Se espera que el método para aumentar significativamente la precisión de los resultados experimentales mediante la reducción de la ocurrencia de falsos positivos obtenidos en otros sistemas híbridos .