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Toma cuatro tubos de ensayo limpios y miden 100 microlitros de acetato de etilo en el primer lugar con la pipeta . Añadir 50 microlitros al segundo , 25 al tercero y 5 para el cuarto .
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Cambio de puntas de pipeta y añadir agua desionizada a cada tubo . Para el primer tubo de añadir 1,8 ml , a continuación, 1,9 ml al segundo tubo , 1,95 ml al tercer tubo y 1,6 mL a la cuarta . Agitar con la punta de la pipeta para mezclar , asegurándose de cambiar las puntas de pipeta entre tubos .
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Transferir 1 ml de la mezcla en cada tubo para cuatro cubetas limpias . Una vez más , asegúrese de cambiar las puntas de pipeta entre tubos .
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Insertar el primero de los cuatro cubetas en un espectrofotómetro y medida calibrada absorbencia suprimida , a 215 nm . Si no está seguro de cómo cambiar la longitud de onda y /o blanco de su espectrofotómetro , consulte las instrucciones del fabricante ; el procedimiento puede variar algo dependiendo del dispositivo . Registre el valor a medir y tomar mediciones de los contenidos de los otros tres cubetas .
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Tome un embudo de separación limpia y asegúrese de que la llave de paso o de drenaje al final se cierra . Retire el tapón en la parte superior .
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Añadir 2 ml del acetato de etilo , seguido de 15 ml de agua y 15 ml de octanol . Si es necesario , usted puede apoyar a su embudo de separación con un anillo en un soporte de anillo mientras lo hace .
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Retire el embudo de vidrio y sustituir el tapón. Sujete el embudo de separación con ambas manos con una mano colocada sobre el tapón para asegurarse de que no sale . Agitar el embudo de un lado a otro un par de veces . Luego incline hacia atrás y abrir la llave de paso para aliviar la presión . Repita este procedimiento hasta que haya sacudido el contenido para un total de 30 segundos más o menos . Asegúrese de que siempre lo agita una o dos veces y luego liberar la presión. Si usted permite que la presión se acumule en el interior , podría provocar que el tapón para salir y liberar a todos los contenidos en su mesa de laboratorio .
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Coloque el embudo de separación en un anillo unido a un soporte universal . Permiten que el contenido se separan en dos capas . La capa superior es octanol ; la capa inferior es agua. Recoger la fase agua y medir su capacidad de absorción en la región UV del espectro.
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Colocar un matraz pequeño (~ 25 ml) bajo el embudo de separación y drenar unos pocos ml de la capa de agua en el matraz . Eliminar 1 ml del contenido del matraz con su micropipeta y transferirlo a una cubeta limpia .
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Inserte la cubeta en el espectrofotómetro y medir la absorbencia a 215 nm .
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Tome sus datos de absorbancia y lo inserta en un programa de hoja de cálculo como Open Office o Excel . Para las muestras de acetato de etilo cuatro que preparó al inicio , introduzca la molaridad en una columna y la capacidad de absorción en una columna contigua. La molaridad de las cuatro muestras es como sigue: 100 microlitros de muestra : 0,5091 molar ; Muestra de 50 microlitros : 0,2545 molar ; 25 microlitros de muestra : 0,1273 molar ; y 5 microlitros de muestra : 0,02545 molar
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Uso del programa de hoja de cálculo para elaborar un gráfico de dispersión de las parcelas de estos cuatro puntos de datos con molaridades o concentraciones en el eje x y la absorbencia de la y. . Si no está seguro de cómo hacer esto , consulte la guía del usuario o el menú de ayuda para su programa de hoja de cálculo. Utilizando el programa de hoja de cálculo, ajustar una ecuación lineal o recta de mejor ajuste de la forma y = mx + b para estos datos. El x - variable en esta ecuación es la concentración , mientras que la variable y es la capacidad de absorción.
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Tome la absorbencia de la muestra de 2 ml de acetato de etilo en el embudo de separación y se divide por el m -valor de la ecuación de su programa de hoja de cálculo y restar el valor b . Si el m - valor es 1.2 , por ejemplo, y el b - valor es de 0,2 , mientras que la capacidad de absorción es 0,42 , restar 0,2 de 0,42 y dividir el resultado por 0,5 para obtener una concentración de 0,183 moles por litro .
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Multiplique su valor de concentración por 0.015 litros desde que tenías 10 ml de agua en su embudo de separación . Si su concentración fue de 0,183 , por ejemplo , tendría que multiplicar por 0.015 para obtener 2.745 x 10 ^ -3 moles de acetato de etilo presente .
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Reste el resultado del paso 14 de 0,02036 moles de acetato de etilo , que fue la cantidad que ha añadido originalmente . Si usted tenía 2.745 x 10 ^ -3 moles en la capa de agua , por ejemplo , restar este número de 0,02036 moles para obtener 0,01762 moles presentes en la capa de octanol .
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Divide la cantidad presente en la capa de octanol por la cantidad presente en la capa de agua , y esto le da el coeficiente de reparto de su líquido. En este ejemplo se utiliza acetato de etilo , pero puede utilizar otros líquidos , siempre y cuando usted ajusta las concentraciones y valores de molaridad adecuada .