Cómo reducir la unión no específica de Contenedores

En un Inmunoensayo la capacidad de unión en un envase o en los pocillos de la microplaca es mayor que la cantidad de proteína se coloca en el recipiente o pozos . Para disminuir o prevenir que los anticuerpos u otros tipos de proteínas y moléculas de absorber al recipiente o pozos , el ensayo debe ser lavado con el tampón apropiado y un reactivo de bloqueo específico debe ser añadido. El tipo de tampón y el reactivo de bloqueo elegido depende del tipo de assay.Things experimentales que necesitará pozos Plate
solución Buffer
reactivo bloqueo
pipeta
Antígeno Anticuerpo

Mostrar MoreInstructions Matemáticas 1

Escudo los pocillos de la placa con el antígeno . Utilice una dilución de antígeno . Soluciones puras de antígeno no son necesarios ya que sólo aproximadamente el 3 por ciento de la proteína en la muestra es la proteína diana. Al diluir , asegurar que las muestras contienen el antígeno a una concentración que esté dentro del rango de detección del anticuerpo. Pipetear la solución de dilución del antígeno por los pocillos de la placa . Algunas placas pueden ser pre - recubiertas con antígeno. Lea las instrucciones suministradas con los pocillos de la placa .
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Cubra las placas con un plástico adhesivo e incubar durante la noche. Lavar las placas con las soluciones tampón, tales como solución salina tamponada con Tris o solución salina tamponada con fosfato. Para lavar , enjuagar los platos usando un frasco lleno de la solución tampón sobre un fregadero de laboratorio . Pat las placas con una toalla de papel para eliminar cualquier resto de gotas de solución tampón.
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reducir la unión no específica de proteínas y moléculas usando un tampón de bloqueo o reactivo , tal como un detergente bloqueador , leche en polvo o de suero bovino. El tipo de reactivo de bloqueo utilizado dependerá del ensayo. Añadir el reactivo de bloqueo a los pocillos utilizando una pipeta. Cubrir la placa de nuevo con plástico adhesivo y se incuban durante la noche.
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Re - lavar los pocillos de la placa de nuevo utilizando una solución tampón. Estos pasos disminuir la cantidad de unión no específica que puede ocurrir a los pocillos de la placa antes de añadir la solución de anticuerpo necesaria para el procedimiento. Además , los reactivos de bloqueo pueden ayudar a reducir los colores de fondo en los resultados de los ensayos .