Cómo calcular la concentración de anticuerpos

Uno de los métodos más comunes de cálculo de una concentración de proteína en el laboratorio es el uso de un ensayo de Bradford . El Bradford reactivo es un reactivo colorimétrico que cambia de color basado en la concentración de proteínas . Mediante la combinación de una curva estándar conocido con el reactivo Bradford , puede crear una medida contra la cual se puede calcular la concentración de cualquier proteína , incluyendo antibodies.Things que necesitará
anticuerpo purificado en un tampón conocido
Buffer coincidir el suspensión del anticuerpo liofilizado
albúmina de suero bovino (BSA )
tubos Microcentrifge
Laboratorio pluma
Vortexer
a escala de laboratorio
de pesaje de papel
pipeta 1 ml de reactivo de Bradford

placa Multi - así
lector de placas colorimétrico
Microsoft Excel
libro Lab
Pen
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Crear un estándar de
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medir 200 mg de BSA en el peso de papel utilizando una escala de laboratorio. Encierre en un tubo de microcentrífuga . Añadir 2 ml de tampón al tubo de microcentrífuga que contiene los 200 mg de BSA. Etiquetar este tubo "1"
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Vortex Tubo 1 hasta la BSA se disuelva por completo .
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Eliminar 500 ul de la BSA en tampón y la transferencia a un segundo tubo. Etiquetar este tubo "2" Añadir 500 ul de tampón llanura a tubo 2.
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Eliminar 200 ul de BSA en tampón de metro 1 y transferirlo a un tubo nuevo . Etiquetar este tubo "3" Añadir 800 ul de tampón llanura a tubo 3.
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Eliminar 100 ul de BSA en tampón de metro 1 y transferirlo a un tubo nuevo . Etiquetar este tubo "4" Añadir 900 ul de tampón llanura a tubo 4.
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Eliminar 10 ul de BSA en tampón de metro 1 y transferirlo a un tubo nuevo . Etiquetar este tubo "5" Añadir 990 ul de tampón llanura a tubo 5. Tubos 1- 5 comprenden una serie estándar graduada . El primer tubo tiene una concentración conocida de 100 mg /ml; la segunda , 50 mg /ml; el tercero , 20 mg /ml , la cuarta , 10 mg /ml; y el quinto , 1 mg /ml. Cada tubo contiene aproximadamente 1 ml de solución.
Crear Antibody diluciones
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Añadir 5 0UL de anticuerpo purificado a 95 0UL de tampón . Etiquetar este tubo " A"
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Añadir 10 ul de anticuerpo purificado a 990 ul de tampón . Etiquetar este tubo " B"
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Añadir 2 ul de anticuerpo purificado a 998 ul de tampón . Etiquetar este tubo " C "
Cargue la placa
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Colocar 0,5 ml de tampón normal en los primeros pozos en dos columnas de la placa de múltiples pocillos .
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Coloque 0.5 ml del contenido del tubo 1 en el segundo pocillos de las dos primeras columnas de la placa de múltiples pocillos . Continuar por la serie gradual hasta que las dos primeras columnas contienen 0,5 ml de una solución estándar de BSA de cada uno de los tubos 1-5 , incluyendo pozos para la memoria de llanura .
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Añadir 0,5 ml de reactivo Bradford a cada así . Agite la placa para mezclar el reactivo con las soluciones proteicas , teniendo cuidado de no derramar el contenido de alguno de los pozos . Espere 5 minutos.
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Leer la placa según el protocolo específico para su lector de placas a una longitud de onda de 595 nm .
Calcular Anticuerpo Concentración

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Copie los valores leídos desde el lector de placas en Microsoft Excel .
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Crear un gráfico a partir de las dos columnas de valores que representan el estándar de BSA usando el Asistente para gráficos en Microsoft Excel .
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Trazar los puntos medidos a partir de las diluciones de anticuerpos en el gráfico de Excel . Lea la concentración correspondiente de proteína de acuerdo con el valor del eje y para el punto de dilución de anticuerpos en el gráfico de Excel .
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En función de si usted está utilizando los valores obtenidos a partir de tubos A, B o C , se multiplica el valor por cualquiera de 20 , 40 o 500 , respectivamente. El valor resultante es la concentración de su anticuerpo purificado .