Técnicas Columna Verificación en HPLC

cromatografía de líquidos de alta resolución ( HPLC ) es una herramienta valiosa para los químicos orgánicos modernos , ya que les permite no sólo para separar una mezcla en sus componentes , sino también para cuantificar la cantidad de cada uno es presente . Aunque los dispositivos de HPLC son sofisticados instrumentos , su desempeño se deteriora gradualmente con el tiempo . Para asegurarse de que funcionan correctamente y la obtención de resultados fiables , es importante verificar periódicamente su desempeño . Caudal & amp ; Presión

La bomba debe ser capaz de mantener los caudales precisos . Prueba de la velocidad de flujo es bastante sencillo y se limita implica la medición de la cantidad de tiempo necesario para recoger una cantidad elegida arbitrariamente de disolvente de la columna a diferentes ajustes de velocidad de flujo. Presión de la bomba puede ser probado conectando la salida de la bomba con una tuerca muertos y conectar un grabador para medir la presión de la bomba de cabeza . La presión debe aumentar rápidamente a cerca de 3.000 libras por pulgada cuadrada ( PSI ) , luego aumentar más gradualmente a una presión más alta , momento en el que la bomba se apagará automáticamente . Si la presión fluctúa a 3.000 PSI o disminuye rápidamente después de la bomba se apaga , por lo general implica un mal funcionamiento , como una fuga en el sistema .
Gradient

La bomba también debe ser capaz de variar con precisión la composición de la fase de disolvente o móvil, eluyendo con ello o lavado de la columna cada vez más compuestos no polares como el porcentaje de los menos polares disolvente aumenta . Exactitud de degradado se prueba utilizando dos canales a la vez, uno de ellos proporcionando disolvente puro y el otro un disolvente con un trazador químico disuelto , como la cafeína . A medida que la concentración de la segunda solución aumenta , se puede medir la absorción ultravioleta ( UV ) de la salida de la columna y utilizar estos datos para verificar la exactitud de degradado.
Módulo Inyector

precisión del módulo inyector se puede probar mediante la realización de seis inyecciones repetidas con una sola muestra ; discrepancias significativas en sus resultados sugieren que tiene un problema . Algunos experimentos implican volúmenes de inyección variables , por lo que también es importante para poner a prueba la capacidad del inyector para extraer la cantidad apropiada de muestra. Al llevar a cabo inyecciones de toda la gama de 0 a 100 microlitros , un químico puede obtener y los datos de la trama y determinar la correlación entre los resultados y la concentración de la muestra . Una débil correlación sugiere un mal funcionamiento.
Detector Módulo

La absorbancia registros del módulo detector de soluto y disolvente de elución o que fluye desde la parte inferior de la columna, por lo que su precisión es especialmente crítico para asegurar buenos resultados . Muchos instrumentos de HPLC incluyen construido en capacidad de verificación de longitud de onda para garantizar la longitud de onda del detector utiliza es el mismo que el que usted ha seleccionado . Otra prueba implica el uso de una serie de muestras que contienen una concentración creciente de un compuesto como la cafeína . El químico puede entonces trazar los resultados frente a la concentración de la solución de ensayo y determinar la fuerza de la correlación . Una débil correlación sugiere un mal funcionamiento.