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La ley de Beer- Lambert , que establece que la absorbancia es proporcional o tiene una relación lineal con la concentración de la especie absorbente , sólo es cierto para las densidades ópticas inferiores a 0,4 . Sin embargo , las muestras con densidades ópticas mayores que 0,4 se pueden diluir por un factor de dilución definido y sus densidades ópticas medidas . Si los valores medidos se dividen por el factor de dilución , para producir la densidad óptica corregida , este nuevo valor es proporcional al número de células en la muestra .
Espectrofotómetro
la densidad óptica se mide por un instrumento , conocido como un espectrofotómetro , que compara el brillo de la luz emitida a partir de dos fuentes, una de las cuales tiene ciertas características estándar . Cuando la luz pasa a través de una suspensión de células , la luz es dispersada por las células de modo que menos de la misma llega a una célula fotoeléctrica - un dispositivo electrónico cuya salida eléctrica varía de acuerdo a la intensidad de la luz que incide en él - en el interior del espectrofotómetro. Por lo tanto , cuanto mayor sea el número de células en la suspensión más débil será la potencia eléctrica de la célula fotoeléctrica , y viceversa.
Densidad Óptica Corrección
En óptica densidades superiores a 0,4, los grados en los cuales las células pueden ser ensombrecidos por otras células o reflejar la luz muchas veces es apreciable. A densidades ópticas superiores , la densidad óptica no corregida de las suspensiones de células ya no es directamente proporcional al número de células . Sin embargo , la densidad óptica no corregida de las suspensiones de células diluidas es casi proporcional a sus densidades relativas conocidas con precisión - la relación de sus densidades a la de una sustancia de referencia , tal como agua - por lo que es una hipótesis de trabajo razonable de que la densidad óptica sin corregir de una suspensión celular altamente diluido es, de hecho , su verdadera densidad óptica .
densidad óptica relativa
por multiplicando el valor de la densidad relativa de cualquier suspensión de células por el básica valor de densidad óptica obtenidos a partir de la suspensión de células altamente diluida , es posible obtener la densidad óptica corregida . Sin embargo , para hacer la medición lo más exacta posible , el valor básico de la densidad óptica se debe obtener de múltiples lecturas del espectrómetro.